計畫摘要
本計畫擬利用低溫與超低溫冰凍保存法來保存牛樟與轉基因臺灣紅豆杉細胞。低溫保存係利用生長抑制劑、光照與低溫4℃至12℃，以延長繼代培養的時間。超低溫冷凍保存種質以降低繼代培養成本，則將培養物利用護凍劑、藻膠包埋-玻璃質化或-乾燥法等包埋後，在液態氮中進行長期保存。另一目的在將牛樟芽體與體胚製成人工種子，以克服組培苗出栽馴化的困難，降低育苗成本。105年完成每個月繼代培養B77與B78芽體並進行芽體增殖與抽長，目前兩品系共各培育250個以上抽長芽體與發根苗B77(80株)，B78(60株)。定期繼代培養轉基因台灣紅豆杉細胞與進行二次代謝物含量調查，目前共培育35個以上細胞株，細胞生長與紫杉烷類含量穩定。轉基因台灣紅豆杉細胞可以低溫與超低溫保存，低溫保存2年細胞可恢復生長，超低溫保存，細胞需先於4℃培養培養2-3週後再移入超低溫(-196℃)才能存活。牛樟芽體低溫保存3年有83-87%芽體可恢復生長。牛樟芽體藻膠包埋過程中，以CaCl2˙2H2O處理10min 的保水率最高，包埋芽體可於MS培養基及蛭石的介質中，發育成具根、莖、葉的小苗。