計畫摘要
樹木褐根病(Phellinus noxius)是國內林木重要病害。本計畫利用分子技術，開發敏感度高專一性強之PCR診斷技術，以提供褐根病快速診斷鑑定；並建立樹木褐根病之快速診斷SOP流程。本研究團隊於過去已完成樹木褐根病PCR快速檢測技術之建立（Wu et al., 2008），99年度工作內容主要針對樹木褐根病之序列分析、不同檢體檢測技術比較及SOP技術之建立。期中主要已完成褐根病菌的序列分析及三種不同片段引子對設計，DNA片段分別為653bp、282bp及228bp，並應用於褐根病病原菌不同系統之檢測。針對土壤褐根病菌檢測，再設計兩條核酸引子將原先之PCR片段縮短，片段長度分別為282bp及228bp，以提高檢測之敏感度。其中以G1F/G1R2引子對較佳，對各種根腐病菌phellinu. Spp.，進行PCR增幅測試，結果僅有Phellinus noxius，增幅出228bp之核酸片段，其餘根腐病菌則無，亦無非專一性片段出現。因PCR產物僅為228bp，故可縮減PCR反應時間至70 分鐘，電泳時間亦可縮短。期末進一步比較不同之褐根病樣本，包括褐根病之病根組織及土壤樣本，以不同之檢測方法：
(1)商品化核酸抽取套件抽取病原核酸
(2)以傳統之有機萃取法萃取病原核酸
(3)先以培養基分離病原再進行核酸抽取
，之後進行PCR分子技術檢測，比較各種方法之差異性及優缺點。結果證明褐根病菌存在於病根組織較病土樣本為多，病根組織為較佳之檢測樣本，但若必須進行土壤篩檢時，可利用雙重PCR提高檢測之靈敏度，亦可達到檢測之目的，此實驗成果可作為未來林木褐根病診斷及土壤篩檢之參考依據。